（2）黑豆活性多肽抗氧化与酶浓度值的关联

参考于慧等的办法开展DPPH氧自由基清除率的测量。将2mL一定含量的黑豆活性多肽水溶液和2mL的0.12mm01·L^-1DPPH水溶液开展混和，遮光于25℃标准下反映30min，取下后于517nm光波长下开展吸光度值的测量，这时OD值值纪录为A_i；将以上全过程中的2mLDPPH水溶液用工业乙醇替代，随后与2mL黑豆活性多肽水溶液开展反映，此前提下测量吸光度值纪录为A_j，将2mL工业乙醇与2mLDPPH水溶液反映的标准做为空缺组，这时纪录吸光度数值Ao。結果如图2所显示。

由图2得知，当酶浓度值小于6％时，DPPH清除率伴随着酶浓度值的提高而扩大，当酶浓度值超出6％时，DPPH清除率伴随着酶浓度值的上升而减少。总体展现先升高后降低的根本原因取决于伴随着酶浓度值的上升，合理酶浓度值慢慢增加。当底物的浓度值保持不会改变，合理酶浓度值慢慢增加，进而具有抑制效果，使酶水解反应的不完全，故水解反应获得的抗氧化性肽降低，从而造成 DPPH清除率减少。

（3）黑豆活性多肽抗氧化与pH的关联

本试验取决于科学研究酶法对黑豆蛋白质水解反应的抗氧化性肽的技术提升，故以DPPH为指标值，挑选酶解時间、酶解溫度、酶加上量及其pH为要素开展单要素试验。更改反映pH，結果见3所显示。
 

由图中得知，当pH在7.0～9.0时，DPPH的清除率伴随着pH的扩大慢慢扩大，当pH为9.00时，DPPH清除率做到最高值，为43.89％。当pH超出9.0时，DPPH清除率慢慢减少。这是由于胰蛋白酶仅有在一定的pH区段内有着较高的活力，当胰蛋白酶处在偏酸或过碱的情况下时胰蛋白酶的构造会被毁坏，造成 一部分蛋白质没法彻底水解反应，亲水性官能团未彻底曝露，促使转化成肽的抗氧化性涪陛减少。

（4）黑豆活性多肽抗氧化与酶解時间的关联

根据单要素试验的結果，能够挑选出各要素的三个水准。因此在这个基础以上，运用数据分析手机软件创建4要素3水准的Box—Behnken实体模型，开展回复面可靠性设计。更改酶解時间結果见4所显示。

二、結果与探讨

1、单要素试验結果

（1）黑豆活性多肽抗氧化与酶解溫度的关联

将黑豆蛋白质配备成一定含量的水溶液，水浴加热至100℃开展15min匀质解决。待水溶液降温至酶解适宜溫度，水浴隔热保温，向水溶液中添加0.5mol／L的NaOH调整其pH，酶解一段时间后100℃水浴消灭10min，室内温度下离心式(4000r／min，20min)，将上清液干冻后储存。結果如图所示l所显示。

由图1得知，当酶解溫度小于50℃，DPPH清除率与气温正相关，当气温超出50℃时，DPPH清除率逐渐降低。这是由于胰蛋白酶对平稳的需求较高，溫度过低会危害酶解的反应速率，使酶解反映不完全，进而危害抗氧化性肽的抗氧化性实际效果。而气温过高而会危害胰蛋白酶的活力，使蛋白质酶的活性减少，没法使蛋白质水解反应成具备抗氧化的小分子活性肽段，进而使DPPH清除率减少。

（2）黑豆活性多肽抗氧化与酶浓度值的关联

将2mL一定含量的黑豆活性多肽水溶液和2mL的0.12mm01·L^-1DPPH水溶液开展混和，遮光于25℃标准下反映30min，取下后于517nm光波长下开展吸光度值的测量，这时OD值值纪录为A_i；将以上全过程中的2mLDPPH水溶液用没有水酒精替代，随后与2mL黑豆活性多肽水溶液开展反映，此前提下测量吸光度值纪录为A_j，将2mL工业乙醇与2mLDPPH水溶液反映的标准做为空缺组，这时纪录吸光度数值Ao。結果如图2所显示。

由图2得知，当酶浓度值小于6％时，DPPH清除率伴随着酶浓度值的提高而扩大，当酶浓度值超出6％时，DPPH清除率伴随着酶浓度值的上升而减少。总体展现先升高后降低的根本原因取决于伴随着酶浓度值的上升，合理酶浓度值慢慢增加。当底物的浓度值保持不会改变，合理酶浓度值慢慢增加，进而具有抑制效果，使酶水解反应的不完全，故水解反应获得的抗氧化性肽降低，从而造成 DPPH清除率减少。

（3）黑豆活性多肽抗氧化与pH的关联

本试验取决于科学研究酶法对黑豆蛋白质水解反应的抗氧化性肽的技术提升，故以DPPH为指标值，挑选酶解時间、酶解溫度、酶加上量及其pH为要素开展单要素试验。

试验标准开展试验，更改反映pH，結果见3所显示。

由图中得知，当pH在7.0～9.0时，DPPH的清除率伴随着pH的扩大慢慢扩大，当pH为9.00时，DPPH清除率做到最高值，为43.89％。当pH超出9.0时，DPPH清除率慢慢减少。这是由于胰蛋白酶仅有在一定的pH区段内有着较高的活力，当胰蛋白酶处在偏酸或过碱的情况下时胰蛋白酶的构造会被毁坏，造成 一部分蛋白质没法彻底水解反应，亲水性官能团未彻底曝露，促使转化成肽的抗氧化性涪陛减少。