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液相色谱-串联质谱法测定饲料中16种氨基酸 (一)

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2023-04-02 09:27:15 关注: 0 次
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试验旨在建立检测饲料中16种氨基酸的液相色谱-串联质谱(LC-MS)方法。采用C18反相色谱柱进行组分分离,以0.1%甲酸水和甲醇按梯度洗脱程序进行洗脱,优化色谱条件和质谱参数。结果表明,16种氨基酸在0.01~50.00μmol/L范围内线性良好,线性相关系数均大于0.991 0,检出限为1~10 ng/g,定性重复性为0.02%~0.12%,定量重复性为0.11%~0.94%,回收率为97.3%~104.0%。在不同种类的样品测试中,该方法与国家标准方法的相对偏差均小于5%,结果准确可靠。试验方法检测效率高、灵敏度高、回收效果良好、定性和定量准确,能够满足饲料中16种氨基酸的常规检测。

氨基酸是含有碱性氨基和酸性羧基的一类有机化合物,是构成生命体蛋白质的基本物质。蛋白质作为人体必需的营养物质,在人体内不能被直接利用,而是在胃肠道中经过多种消化酶的作用,将高分子蛋白质分解为低分子的氨基酸后被人体吸收。氨基酸进入血液中与其输出速度几乎相等,使体内氨基酸代谢处于动态平衡。当摄入的蛋白质含量适宜时,蛋白质和氨基酸之间不断合成和分解形成一种平衡,从而达到机体的营养平衡状态。蛋白质突然增加或减少摄入量时,平衡机制会被破坏。如果持续时间过长,可能会导致体内抗体的死亡。饲料作为畜禽动物摄入的食物,对其所含氨基酸含量的监测至关重要。

检测氨基酸的方法有氨基酸分析仪法、毛细管电泳检测紫外测定法、衍生-电位传感法、高效液相色谱法等。氨基酸分析仪法最为常见,但分析时长在1 h以上、检测效率低;毛细管电泳检测紫外测定法存在精度低、检测结果不准确的缺点;高效液相色谱法检测时长较长、需要柱前衍生、操作步骤烦琐。所以,建立一种能快捷准确的测定饲料中氨基酸含量的液相色谱-串联质谱法迫在眉睫。目前,已有液相色谱-串联质谱法(LC-MS)检测食品和保健品中的氨基酸含量。本研究建立能同时测定不同种类的饲料中16种氨基酸的LC-MS方法,为饲料中氨基酸含量的测定提供技术参考。

1材料与方法

1.1试验仪器

Ulti Mate 3000液相色谱系统(Thermo)、TSQ Quantiva质谱仪(Thermo)、MS205DU十万分之一天平(Mettler Toledo)、101-1A电热鼓风干燥箱(北京科伟永兴仪器有限公司)、MTN-5800A氮吹仪(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)、涡轮混合器。

1.2试验试剂

16种氨基酸标准溶液(100 nmol/m L)购自德国曼默博尔公司;盐酸(优级纯)购自四川西陇科学有限公司;甲酸(色谱纯)购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;购自甲醇(色谱纯)Sigma公司。

6 mol/L盐酸溶液:500 m L盐酸和500 m L等比例混合;0.1%甲酸溶液:移取1.0 m L甲酸于1 000 m L容量瓶中,用超纯水定容至刻度。

1.3试验方法

1.3.1色谱条件

色谱柱:Hypersil GOLD 50×2.1 mm,1.9μm;柱温:40℃;流速:0.2 m L/min;洗脱程序见表1。

1.3.2质谱条件

离子源:可加热电喷雾离子源(H-ESI);扫描模式:正离子扫描;喷雾电压:3 500 V;鞘气:35 psi;辅助气:10 psi;离子传输管温度:350℃;源温度:300℃;16种氨基酸质谱多反应监测(SRM)参数见表2。

1.3.3标准工作溶液的配制

准确移取1.2中的16种氨基酸标准溶液1.0 m L于10 m L棕色容量瓶中,用0.1%甲酸水溶液稀释并定容至刻度,配制成浓度为10μmol/L的标准工作溶液。

1.3.4样品前处理

称取试样约100 mg,置于20 m L水解管中,加入6 mol/L的盐酸溶液10.0 m L,于氮气下充氮3 min,赶去管中空气,加盖;(110±2)℃的电热鼓风干燥箱中水解24 h,取出冷却,摇匀,使用快速定性滤纸过滤至另一10 m L离心管中;量取0.1 m L样液于55℃下氮气吹干,按样品中氨基酸含量,加入1~10 m L的0.1%甲酸水溶液复溶,过0.22μm水相滤膜后上机测定,上机溶液中各氨基酸含量应与标准工作溶液相近。

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